ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗ti，而且也可用于測定體液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大，

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

3. 產品特點

一、高效、靈敏、特異的抗ti；

二、穩定的重復性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；

五、節省實驗經費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標液1PPM，就是1毫克/升，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個與真實成分有密切的關系，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定，樣品水中含有無機氯20mg/L，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為29.8mg/L，則認為回收率為99%。

組成結構

1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內du素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿：EDTA、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒成分

1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標記抗ti: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標記抗ti稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N硫suan 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗ti和顯色劑)

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結

c. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗ti，與待測抗原進行鍵結

d. 洗去多余未鍵結一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結

e. 洗去多余未鍵結二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

原理：針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標抗ti，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗ti，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。

c. 洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗ti，與待測的一次抗ti鍵結。

d. 洗去多余未鍵結二次抗ti，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗ti的含量。

原理：利用酶標記的抗抗ti以檢測已與固相結合的受檢抗ti。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗ti就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結，即所謂競爭法之由來。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

e. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

[說 明]

1.由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量 技術風險。

2.最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及 當時的實驗環境密切相關，請務必準備充足的標本備份。

3.不同批次的同一產品可能會有少許差別，如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進行實驗操作，網站電子版說明書僅作參考。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最jia的檢測結果。

5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。

7.若樣本為細胞培養上清，因該類樣本干擾因素較多，如:細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產品所使用的檢測抗ti及捕獲抗ti不匹配，而不被檢測出。

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